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电泳分析仪阅读:140

电泳分析仪指利用带电粒子在电场作用下向极性相反的电极方向移动的现象,实现多组分物质分离、分析的仪器设备。

常用方法

  1、纸电泳

  纸电泳(PaperElectrophoresis,PE)指用滤纸作为支持介质的电泳方法,是最早使用的区带电泳。在对某些蛋白质(如糖蛋白、脂蛋白等)的分离尤其对氨基酸混合物的分离非常有效。

  将滤纸条水平架设在两个装有缓冲溶液的容器之间,样品点于滤纸中央。当滤纸条被缓冲液润湿后,再盖上绝缘密封罩,即可由电泳电源输入直流电压(100V~1000V)进行电泳。

  2、醋酸纤维素薄膜电泳

  醋酸纤维素薄膜电泳的特点是分离速度快、电泳时间短、样本用量少,特别适合于病理情况下微量异常蛋白的检测,广泛用于分离和测定血清蛋白、血红蛋白、糖蛋白、结合球蛋白、脂蛋白、同工酶等的临床医学检验。电泳时经过膜的预处理、加样、电泳、染色、脱色与透明即可得到满意的分离效果。

  3、凝胶电泳

  凝胶电泳(GelElectrophoresis)是由区带电泳派生出的一种用凝胶物质作为支持物的电泳方式。常用的凝胶为葡萄糖、交联聚丙烯酰胺和琼脂糖。这种介质具有多孔性,有类似于分子筛的作用,流经凝胶的物质可按分子的大小逐一分离,因此广泛用于测定蛋白质的分子量。

  4、等电聚焦电泳

  等电聚焦电泳(IsoelectricFocusingElectrophoresis,IFE)是一种利用有pH梯度的介质,分离等电点不同的蛋白质的电泳技术。将等电点不同的蛋白质混合物加入有pH梯度的凝胶介质中,在电场内经过一段时间后,各组分将分别聚焦在各自等电点相应的pH值位置上,最后,样品的各组分在各自的等电点聚焦成一条清晰而稳定的窄带。

  5、等速电泳

  等速电泳(Isotachophoresis,ITP)采用两种不同浓度的电解质组成,一种为前导电解质,充满整个毛细管柱;另一种为尾随电解质,置于一端的电泳槽中。前导电解质的迁移率高于任何样品组分,后者则低于任何样品组分,被分离的组分按其不同的迁移率夹在中间,在强电场的作用下,各被分离组分在前导电解质与尾随电解质之间的空隙中移动,实现分离。

  6、双向凝胶电泳

  双向凝胶电泳又称二维凝胶电泳,主要用于分离和分析混合的蛋白质组分,是优于其它方法能够连续地在一块胶上分离数千种蛋白质的方法。

  该方法第一向采用等电聚焦,根据复杂的蛋白质成分中各个蛋白质等电点不同,将蛋白质进行分离。第二向采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳,按蛋白质分子量的大小使其在垂直方向进行分离。其结果呈现为斑点状。

  7、免疫电泳

  免疫电泳(Immunoelectrophoresis)是琼脂平板电泳和双向免疫扩散两种方法的结合。将抗原样本在琼脂平板上先进行电泳,使其中的各种成份彼此分开,然后加入抗体做双向免疫扩散,已分离的各抗原成分与抗体在琼脂中扩散而相遇,在两者比例适当的地方形成复合物,呈现出可见的沉淀弧。


分类

  根据自动化程度不同分为:半自动电泳和全自动电泳。

  根据用途不同分为:蛋白电泳、核酸电泳等。

  根据原理不同分为:等速电泳、等电聚焦电泳、免疫电泳等。

  根据电泳中是否使用支持介质分为:自由电泳和区带电泳。


原理

  物质分子在正常情况下一般不带电,即所带正、负电荷量相等,不显示带电性。但是在一定的物理作用或化学反应条件下,某些物质分子会成为带电的粒子。利用带电粒子因带电性质、颗粒形状、大小及所带电量不同会导致移动速度及方向也不同的性质,实现对样本中不同成分的分离和分析。

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