高效液相色谱仪阅读：1645

    高效液相色谱法只要求样品能制成溶液，不受样品挥发性的限制，流动相可选择的范围宽，固定相的种类繁多，因而可以分离热不稳定和非挥发性的、离解的和非离解的以及各种分子量范围的物质。
    与试样预处理技术相配合，HPLC 所达到的高分辨率和高灵敏度，使分离和同时测定性质上十分相近的物质成为可能，能够分离复杂相体中的微量成分。随着固定相的发展，有可能在充分保持生化物质活性的条件下完成其分离。
    HPLC成为解决生化分析问题最有前途的方法。由于HPLC具有高分辨率、高灵敏度、速度快、色谱柱可反复利用，流出组分易收集等优点，因而被广泛应用到生物化学、食品分析、医药研究、环境分析、无机分析等各种领域。高效液相色谱仪与结构仪器的联用是一个重要的发展方向。
    液相色谱- 质谱联用技术受到普遍重视，如分析氨基甲酸酯农药和多核芳烃等； 液相色谱- 红外光谱联用也发展很快，如在环境污染分析测定水中的烃类，海水中的不挥发烃类，使环境污染分析得到新的发展。

    液固吸附色谱
    1.1分离原理 液固色谱是基于各组分吸附能力的差异进行混合物分离的，其固定相是固体吸附剂。
    1.2固定相 ；吸附色谱固定相可以分为极性和非极性两大类。
    1.3流动相 ；流动相要求：
    1.3.1选用的溶剂应当与固定相互不相溶，并能保持色谱柱的稳定性
    1.3.2选用的溶剂应有高纯度，以防所含微量杂质在柱中积累，引起柱性能的改变。
    1.3.3选用的溶剂性能应与所使用的检测器相匹配，如果使用紫外吸收检测器，就不能选用在检测波长下有紫外吸收的溶剂；若使用示差折光检测器，就不能用梯度洗脱。
    1.3.4选用的溶剂应对样品有足够的溶解能力，以提高测定的灵敏度。
    1.3.5选用的溶剂应具有低的黏度和适当低的沸点。
    1.3.6应尽量避免使用具有显著毒性的溶剂，以保证工作人员的安全
    1.4应用 液固色谱是以表面吸附性能力为依据的，所以它常用于分离极性不同低的化合物，也能分离那些具有相同极性基团，但数量不同的样品。
    液液分配色谱
    1.1分离原理 ；分配色谱法的原理与液液萃取相同，都是分配定律。
    1.2固定相 ；分配色谱固定相由两部分组成，一部分是惰性载体，另一部分是涂渍在惰性载体上的固定液。
    1.3流动相 ；分内色谱中，要求流动相尽可能不与固定液互溶
    1.4应用 ；既能分离极性化合物，又能分离非极性化合物。由于不同极性键合固定相的出现，分离的选择性可得到很好的控制。
    键合相色谱
    1.1分离原理 1.1.1正键合相色谱分离远离：使用的是极性键和固定性，溶质在此类固定相上的分离机理属于分配色谱。
    1.1.2反键合相色谱分离原理：使用的是极性较小的键合固定相，其分离机理可用疏溶剂作用理论来解释。
    1.2固定相 ；按极性大小可分为非极性、弱极性、极性化学键合固定相三种。
    1.3流动相 1.3.1正键合相色谱中，采用和反相液液分配色谱相似的流动相，流动相的主体成分为己烷或庚烷。
    1.3.2反相键合相色谱中，流动相采用和反相液液分配色谱相似的流动相，主题为水。
    1.4应用 1.4.1正键合相色谱法的应用：多用于分离各类极性化合物如染料、炸药、多巴胺、氨基酸等；
    1.4.2反键合相色谱法的应用：由于操作简单，稳定性和重复性好，该方法已成为一种通用型液相色谱分析方法。在生物化学、医药研究、食品分析和环境污染分析等多个领域有了很大的应用和发展。
    凝胶色谱
    凝胶色谱又称分子排阻色谱，它是按照分子尺寸大小顺序进行分离的一种色谱方法。凝胶色谱法的固定相凝胶是一种多孔性的聚合材料，有一定的形状和稳定性。根据所用流动相的不同，凝胶色谱法可以分为两类：即用水溶剂做流动相的凝胶过滤色谱法（GFC）与用有机溶剂如四氢呋喃做流动相的凝胶渗透色谱法（GPC）。

    高压——压力可达150～300 kg/cm2。色谱柱每米降压为75 kg/cm2以上。
    高速——流速为0.1～10.0 mL/min。
    高效——塔板数可达5000/米。在一根柱中同时分离成份可达100种。
    高灵敏度——紫外检测器灵敏度可达0.01ng。同时消耗样品少。
    HPLC与经典液相色谱相比有以下优点：
    速度快——通常分析一个样品在15～30 min，有些样品甚至在5 min内即可完成。
    分辨率高——可选择固定相和流动相以达到分离效果。
    灵敏度高——紫外检测器可达0.01ng，荧光和电化学检测器可达0.1pg。
    色谱柱可反复使用——用一根色谱柱可分离不同的化合物。
    样品量少，容易回收——样品经过色谱柱后不被破坏，可以收集单一组分或做制备。

    在同一色谱条件下，样品中K值大的组分在固定相中滞留时间长，后流出色谱柱；K值小的组分则滞留时间短，先流出色谱柱。混合物中各组分的分配系数相差越大，越容易分离，因此混合物中各组分的分配系数不同是色谱分离的前提。
    在HPLC中，固定相确定后，K主要受流动相的性质影响。实践中主要靠调整流动相的组成配比及pH值，以获得组分间的分配系数差异及适宜的保留时间，达到分离的目的。

    分配系数与组分、流动相和固定相的热力学性质有关，也与温度、压力有关。在不同的色谱分离机制中，K有不同的概念：吸附色谱法为吸附系数，离子交换色谱法为选择性系数　（或称交换系数），凝胶色谱法为渗透参数。但一般情况可用分配系数来表示。
    在条件（流动相、固定相、温度和压力等）一定，样品浓度很低时（Cs、Cm很小）时，K只取决于组分的性质，而与浓度无关。这只是理想状态下的色谱条件，在这种条件下，得到的色谱峰为正常峰；在许多情况下，随着浓度的增大，K减小，这时色谱峰为拖尾峰；而有时随着溶质浓度增大，K也增大，这时色谱峰为前延峰。因此，只有尽可能减少进样量，使组分在柱内浓度降低，K恒定时，才能获得正常峰。