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暗场显微镜是利用斜射照明法阻挡透过标本细节的直射光，以反射光和衍射光来观察标本。在普通显微镜下直射光透过标本的时候，一部分光被吸收，另一部分光透射或折射，形成标本细节内部结构的真实投影。因此，在普通显微镜下所看到的是物体形态和结构。而在暗场显微镜下从侧面照射到物体的光束，绕射或反射造成物体外形的侧影。因此暗场显微镜下所看到的只是物体的轮廓或物体的运动。
暗场观察时不能使用油浸系或水浸系物镜，而用干燥系物镜中镜口率在0.85以下的物镜。假如使用镜口率过大的物镜时，除微粒子反射的光束以外的旁射光束也可进入物镜前透镜。就是这种放大率并不大的物镜下，可以达到观察亚微粒子的要求。Zeiss公司出售的带有孔栏的物镜最适合于此种用途。具体操作如下。
1、安装暗场聚光器检查聚光器的光轴(并非晶体光轴而指几何光学光轴)是否与显微镜的光路一致。聚光镜用中心调节旋钮合轴调整之后，圈锥光束的交点集中到标本平面上。
2、放标本放置标本时在聚光镜前透镜与载物片之间必须浸油。否则来自标本细节的反射光和衍射光束在载物玻片表面进行全反射。观察结果趋于失败。
3、调节聚光镜焦点操纵光源会聚透镜务使圆锥形光束的交点照射到标本平面上。
4、迭择物镜用于暗场观察的物镜中。油浸系或水浸系的物镜不能使用。就是干燥系物镜中也要挑选镜率在0.85以下为好。Zeiss厂出售的本身带有可调光栏的物镜最为适用。如果物镜镜口率过大时，来自聚光镜的部分直射光束进入物镜前透镜，从而干扰暗视野成像效应。如果使用油浸系物镜观察时，必须调节物镜内装孔径光栏。
5、光派的选择暗场显微镜中光能损失太大。因此必须选择光强最大的光源，才能取得较好效果。尤其以超聚光镜观察胶体微粒运动时，光强愈大愈好.
6、浸油的方法聚光镜与载玻片间浸油时特别注意是否有气泡。气泡可招致暗视野观察效果的完全破坏。
暗场显微镜的最关键部件是暗场聚光镜。
1、抛物面聚光镜
抛物面玻璃球体的上下两端平行切削而成的抛物面聚光镜。在它下面中央的沉淀挡光薄膜，只允许其周边入射的照明光束。该光束在球体的抛物面上反射并会聚到标本上.
2、心形聚光镜
将光学材料切削成球面反射系统，并以中光膜阻挡直射光的聚光镜为心形聚光镜。
3、同心球面聚光镜
利用两个球面的同一中心制造的聚光镜，基本原理都相同。这种聚光镜不涂中心挡光金属薄膜，只以球面反射面阻挡中心直射光束。
