超分辨率显微镜阅读：245

　　包括共聚焦扫描头、高灵敏度EMCCD探测器、激光耦合器、同步控制器、激光动力学模块（FRAP）、研究级倒置荧光电动显微镜、超分辨率系统-随机光学重建系统、高精度电动XY平台及高速压电陶瓷Z轴、活细胞培养装置、图像工作站及采集控制软件。

　　超分辨率显微镜其原理主要基于超分辨率成像方法，包括以下几种常见方法:

　　1.点扩散函数重建

　　该方法通过量子点等微小发光点的扩散效应，测量系统的点扩散函数(PSF)并利用逆过程重建样品的高分辨率图像。通过巧妙选择合适的激发强度和探测方式，可以有效地提高显微镜的分辨率，

　　2.结构光显微镜

　　该方法利用具有特殊图案结构的光源照射样品，通过高频投影的多个了光束和频率分析技术，得到叠加图像，从而在频域上提高了分辨率。SIM可以将衍射极限下的分辨率提高约2倍

　　3.刺激发射退火显微镜

　　该方法利用激光在大约50纳米范围内激发荧光标记物，然后通过使用另束特定的激光束使被激发的标记物发生受激发射退火(STED)，从而限制只有核心激发点发光，提高了分辨率。

　　4.单分子定位显微镜

　　该方法利用碰撞助熄灭的性质，使被标记的单个分子在短暂完起的过程中精确地定位，通过多个分子的多次定位获得高分辨率的图像。SMLM 能够将分辨率提高到纳米级别，并广泛应用于生物学研究。这些超分辨率显微镜原理的引入，使得科研人员在微观世界中获得了更为清晰、准确的图像，从而更深入地理解生物学和物理学的相关问题。

　　1.样本准备的关键性

　　在使用超分辨率显微镜之前，样本的准备至关重要。确保样品周定、染色和标记过程正确，以避免破坏或变形样品。

　　2.避免光破坏

　　超分辨率显微镜对光的要求很高，所以在进行成像时，应避免长时问暴露在强光下。确保选择适当的荧光标记和荧光探针，以便在短时问内获取充足信号而不会损害样品。

　　3.控制显微镜震动

　　震动是减少图像质量的主要影响因素之一。确保显微镜架和相关设备的稳定，以减少震动对图像的影响。

　　4.确保图像对焦

　　超分辨率显微镜对样品的焦距要求非常高。通过调整显微镜的焦点来保持图像清晰，以获得高分辨率图像。

　　5.选择适当的数据处理方法

　　在进行图像处理和分析时，选择适合样品和研究问题的适当数据处理方法非常重要。合理选择去噪、去模糊和增强图像对比度等图像处理步骤，以提高图像质量和解决分析问题。

　　1.准备样本

　　首先，选择适合超分辨率显微镜分辨率的样本。样本应具备较高的荧光信号和较低的背景噪声水平，以获得洁晰的图像。微胶束、活细胞、单分子和纳米颗粒都是常见的适用样本，

　　2.标记样本

　　在使用超分辨率显微镜之前，样本需要进行荧光标记。合适的标记方法包括使用荧光探计、染料或免疫标记技术。确保标记物能够与您感兴趣的结构高度特异性地结合。

　　3.调整光路参数

　　在使用超分辨率显微镜之前，您需要调整光源、检测器和镜片的位置和设置。请根据仪器的操作手册进行正确设置，以确保光路参数的准确性和优化，以获得高分辨率图像。

　　4.调节显微镜焦距

　　超分辨率显微镜需要在样品和镜片之间形成最佳焦距。通过调节显微镜的焦距米确保样品在成像时处于最佳状态，并获得最高的分辨率。

　　5.选择合适的成像模式

　　根据样品类型和感兴趣的结构，选择适合的超分辨率成像模式。常见的成像模式包括结构照明显微镜(SIM)、刺激发射显微镜(STED)和单分子显微镜。

　　6.获取图像数据

　　根据您的设置，在显微镜软件中选择适当的参数并开始图像采集。确保采集图像时设置适当的曝光时间，以避免图像过曝或过暗。

　　7.图像处理和分析

　　获取图像后，您可以借助图像处理软件进行优化和增强。常见的图像处理软件包括 ImageJ、Fiji 和 MATLAB 等，对于超分辨率显微镜图像，通过去卷积和增强对比度等方法，进一步提高图像质量。