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1、开机
英光定量PCR仪、与之相连的电脑
2、放样
点击PCR仪上的“Eject”,放入已离心过的八连管样品,再缓慢关闭接样台。
3、点击电脑上的“E盘”,找到“GRT-PCR“文件夹,找到相对应的应用程序,如做蓝耳,就选择”PRRSV”文件夹中的程序:腹泻则为“PEDV"
4、编辑
点开任一程序后,点击“Sample Editor“编辑所放样品的地址以及信息
5、存档
点击“File“选择”Save as",存到相对应的文件夹;务必修改名称(日期、时间)
6、传出:打开编辑好的程序,点击“To0l”→“Instrument Manager”,待灯变绿后(5-7s)再点击“Send/Receive Experiment”,找到要运行的程序,再点击>,便传到荧光定量PCR仪上。
7、运行
选中荧光定量PCR仪上要工作的程序,点击“Start”开始工作。
8、传入
待PCR结束后,打开运行程序,点击“To0l”→“|nstrument Manager”,待灯变绿后(5-7s),再点击“Send/Receive Experiment”,选中相对应的文件夹,找到已结束程序,再点击<,便传到电脑上。
9、实验结果分析
点击已保存已完成的程序,点击“Analysis”,便可进行实验结果的分析
10、关机
点击PCR仪上“Eject”,取出八连管:点“Exit”→”YES’退出,关闭电源,拔下插头即可,另用专用塑料袋套上,以免灰尘侵入缩短使用寿命。
荧光定量PCR仪在多个领域中都发挥着重要作用。在基因表达研究中,科研人员可以利用荧光定量PCR仪实时监测基因表达水平的变化,揭示基因调控的奥秘;在疾病诊断方面,可用于检测病原体、病毒载量等,为疾病的早期发现和治疗提供有力支持;在药物研发过程中,可用于评估药物对基因表达的影响,为药物的筛选和优化提供重要依据。此外,还在环境监测、食品安全、农业生物技术等领域发挥着重要作用。
荧光定量PCR仪工作原理主要依赖于荧光探针或荧光染料与PCR产物之间的特异性结合,通过激发荧光信号来反映PCR产物的生成量。这种技术具有高灵敏度、高特异性和高准确性的特点,使得荧光定量PCR仪能够精确测量目标分子的含量。
荧光定量PCR仪通常包含光学系统、温控系统和数据处理系统三大核心部件。
1、光学系统
负责实时监测荧光信号的变化,确保数据的准确性和可靠性;
2、温控系统
则精确控制PCR反应所需的温度,以确保反应的顺利进行;
3、数据处理系统
则对荧光信号进行收集、分析和处理,最终输出定量结果。
这些部件的协同工作使得荧光定量PCR仪能够高效地完成PCR扩增和荧光信号检测任务。
1、高灵敏度和高特异性
荧光定量PCR仪采用荧光探针或荧光染料与PCR产物特异性结合的方式,大大提高了检测的灵敏度和特异性。这意味着即使在低浓度或复杂样本中,也能准确检测出目标分子的存在和含量。这种高度的灵敏性和特异性使得荧光定量PCR仪在基因表达研究、疾病诊断等领域中具有广泛的应用前景。
2、实时性和动态性
荧光定量PCR仪能够实时监测PCR扩增过程中荧光信号的变化,从而实时反映目标分子的含量变化。这种实时性和动态性使得研究人员能够更直观地了解目标分子的表达情况,进一步揭示基因调控的奥秘。同时,也为疾病的早期发现和治疗提供了有力的支持。
3、操作简便和自动化
荧光定量PCR仪具有操作简便、自动化的特点。其操作过程相对简单,只需将样本和试剂加入到仪器中,设置好反应参数即可开始检测。同时,仪器能够自动完成PCR扩增、荧光信号检测和数据处理等步骤,大大减轻了研究人员的工作负担,提高了工作效率。
4、安全性和无污染
荧光定量PCR仪在全封闭状态下进行PCR扩增和产物分析,有效杜绝了传统PCR开放检测对环境的污染和由此导致的假阳性。这种安全性和无污染的特点使得荧光定量PCR仪在实验室和临床应用中具有更高的可靠性。
5、结果观测重复性好
荧光定量PCR仪采用在线实时观测的方式,使得结果判断更加直观和准确。同时,由于仪器具有高度的稳定性和重复性,因此可以确保每次检测结果的准确性和可靠性。