暗场生物显微镜阅读：58

　　暗场生物显微镜的工作原理是通过屏蔽直射光，利用散射光进行观察，从而实现高分辨率的成像。具体来说，暗场生物显微镜的基本工作原理包括以下几个方面：

　　1.成像原理

　　暗场生物显微镜通过挡住直射光，只让倾斜光照明样品。样品产生的散射光通过物镜成像，形成暗背景上的明亮样品图像。这种成像方式类似于丁达尔效应，能够揭示明场观察下无法看到的细节。

　　2.光路设计

　　暗场生物显微镜的光路设计包括透射暗场和反射暗场两种。透射暗场光路通过在光源和聚光镜之间加入暗场光阑来挡住直射光，形成倾斜光照明样品。反射暗场光路则通过环形反射镜和特殊的物镜前端结构来实现反射照明。

　　3.关键部件

　　暗场生物显微镜的关键部件包括暗场环（暗场光阑）、油浸式暗场聚光镜和带孔径光阑的高倍物镜。简易的暗场生物显微镜只需在普通聚光镜上加装暗场环即可实现。

　　一、准备工作

　　1.将显微镜置于稳固的实验台上，远离震动源，双手取放显微镜。

　　2.安装暗场聚光器，并检查物镜是否适配暗场观察（通常需专用暗场物镜）。

　　3.使用载玻片装载样本，确保样本薄而均匀，必要时可覆盖光学玻璃薄片以提升透射度。将玻片固定于载物台中央，用压片夹或橡皮泥固定。

　　二、光源调节

　　1.开启光源并调至中等亮度，避免过曝。

　　2.调整聚光器高度与光圈，使光线以斜射方式通过样本，形成暗场背景。

　　三、操作步骤

　　1.低倍镜初步观察

　　选择低倍物镜（如4X或10X），下降载物台至物镜接近玻片，通过目镜观察并调节粗/细准焦螺旋直至图像清晰。

　　2.切换暗场模式

　　在显微镜软件或物理控制界面选择“暗场观察模式”（如“FLUO”或“IL”），微调聚光器角度和光圈，优化暗场效果，使样本边缘或透明结构呈现明亮轮廓。

　　3.高倍镜与油镜观察

　　将目标区域移至视野中央后切换高倍物镜（如40X或100X），使用油镜时需在玻片上滴镜油，缓慢降下物镜接触油滴，通过细调焦获得清晰图像；在暗场模式下需降低光源亮度并缩小光圈以增强对比度。

　　四、使用后整理

　　1.关闭电源，降下载物台至最低点，移除玻片并清洁载物台。

　　2.切换回低倍物镜，将聚光器恢复至默认位置，覆盖防尘罩。

　　1.操作时要避免物镜直接接触玻片，调焦时需从侧面观察距离。

　　2.移动显微镜时双手托稳，禁止单手操作或推动设备。

　　3.暗场聚光器需定期清洁，避免灰尘影响斜射光效果；使用油镜后立即用拭镜纸蘸95%酒精擦拭镜头，防止镜油残留。

　　一、日常维护

　　1.清洁

　　每次使用后，应用专用的光学镜头纸轻轻擦拭物镜和目镜，去除灰尘和指纹。对于更顽固的污渍，可以使用少量的无水乙醇或专用的光学清洁液。

　　2.防尘

　　不使用时，应将显微镜覆盖以防止灰尘沉积。最好存放在干净、干燥的地方。

　　3.检查光源

　　定期检查光源是否工作正常。如果灯泡变暗或损坏，应及时更换。

　　二、定期检查与保养

　　1.机械部件润滑

　　根据制造商的指南，定期对显微镜的移动部分（如聚焦旋钮、载物台等）进行适当的润滑处理，以减少磨损并保持操作平滑。

　　2.校准

　　确保显微镜的所有调整机构（如聚光镜高度调节、孔径光阑等）都处于正确的设置状态，必要时进行校正。

　　3.检查电气连接

　　特别是对于带有电控组件的高级型号，要检查所有电线和插头是否有损坏迹象，并确认它们连接牢固。

　　三、故障排除与修理

　　1.如果遇到图像模糊不清的问题，首先检查物镜和目镜是否干净；其次考虑是否需要重新调焦或者调整光路。

　　2.对于无法解决的问题，不要自行拆卸显微镜尝试修理，而应该联系专业的售后服务团队或授权的技术支持人员来进行检查和维修。

　　1.观察细菌的形态和运动

　　暗场生物显微镜能够清晰地显示细菌的形态和运动方式。通过暗场照明，细菌的边缘会变得明亮，而背景则保持黑暗，这使得观察者可以更容易地看到细菌的形态特征，如球形、杆形或螺旋形。此外，暗场生物显微镜还可以观察到细菌的运动方式，如旋转前进或聚集形成菌落。

　　2.研究细菌的生命活动

　　利用暗场生物显微镜，研究人员可以观察细菌的分裂过程、生长速度和繁殖方式，从而深入了解细菌的生命活动规律。此外，暗场生物显微镜还可以用于研究细菌与其他生物体之间的相互作用，如共生或寄生关系。

　　3.观察微小粒子的运动与形态

　　暗场生物显微镜能够观察到小至4-200纳米（nm）的微粒子，分辨率比普通显微镜高50倍。这使得它在观察微小粒子的运动和形态方面具有显著优势，例如在胶体化学领域中观察原虫、细菌的鞭毛、伪足运动等细微的动态过程。

　　4.医学检验中的应用

　　在医学检验中，暗场生物显微镜常用于观察人体体液中的各种微粒，如螺旋体、尿管形、结晶等。特别是在检查梅毒螺旋体时，暗视野显微镜是一种重要的病原体检查方法，对早期梅毒的诊断具有重要意义。

　　5.科研与教学

　　暗场生物显微镜在科研和教学领域也有广泛应用。它能够帮助科研人员更清晰地观察微观世界，推动相关学科的发展。同时，在教学方面，暗视野显微镜是生物学、医学等学科中不可或缺的教学工具。