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动态光散射仪的原理是基于颗粒对光的散射,通过测量光强的波动随时间的变化来分析溶液中粒子的运动特性,从而确定粒子的尺寸分布和其他物理化学性质。
动态光散射仪利用激光束照射样品,通过快速光子检测器在已知散射角θ处检测散射光的涨落。与静态光散射不同,动态光散射不需要计算纯溶剂和溶液散射光强之间的微小差别,而是直接观察散射光强随时间的涨落。这种涨落直接反映了溶液中粒子的布朗运动。粒子的布朗运动速度依赖于粒子的大小和媒介粘度,粒子越小,粘度越低,布朗运动越快。因此,小颗粒造成的散射光信号波动速度较快,大颗粒造成的散射光信号波动较慢。
光电检测器将散射光信号转化为电流信号,再通过数字相关器的运算处理,得到颗粒在溶液中扩散的速度信息,即扩散系数D。通过Stockes-Einstein方程,可以得到颗粒、大分子的大小,即流体力学直径DH及其分布。此外,动态光散射技术还融合了电泳光散射光路,具有测量Zeta电位的能力,进一步扩展了其应用范围。
动态光散射仪(DLS)是一种物理表征手段,通过测量光强的波动随时间的变化来分析溶液或悬浮液中的粒径分布。这种技术也被称为激光光散射、光子相关光谱或准弹性光散射。DLS仪器能够测量溶液中的分子颗粒的动态运动性质,这些运动的性质与颗粒的形状和分子量密切相关。通过光谱学技术检测溶液散射光的频率变化,可以获取溶液中分子颗粒的分子量、构象等理化信息。这种方法非常适合于对生物大分子,特别是蛋白质分子的研究,能够提供蛋白质分子在不同溶液条件下的生化性质和状态,是蛋白质科学研究的重要技术手段。
功能特点包括但不限于:
1.测定蛋白质分子的均一性、pH稳定性、热稳定性、蛋白质变复性及折叠的研究、临界胶束浓度的测定以及动态过程的检测。
2.独立测定生物大分子的重均分子量、流体力学半径、粒子尺寸大小及分布状态。
3.与多角度激光光散射(MALS)联机使用,同时提供样品静态和动态光散射的数据。
此外,它具有高灵敏度、高稳定性,操作快速简单,无需系统校正,可直接得到结果,并且设计坚固耐用,数据可复现性好,使用简便。
一、仪器准备
1.确保动态光散射仪处于良好的工作状态,检查仪器的电源和连接线是否正常,
2.打开仪器,预热一段时间,通常需要十分钟左右。
3.确保仪器所在的实验室环境稳定,避免空气流动和震动对测量结果的影响。
4.准备样品,确保样品已经适当稀释,并去除其中的气泡。
二、操作步骤
1.连接样品池:将样品注入幼态光散射仪的样品池中。注意,样品池应该是清洁的,不得有杂质和污染物。
2.调整仪器参数:根据样品的性质和需求,选择合适的参数进行测量。主要包括激光功率、散射角度和检测时问等。
3.测量数据收集:点击“开始测量”按钮,仪器将自动进行数据不集并显示在屏幕上。根据实际情况,可以选择连续测量或单次测量。
4.数据分析:仪器通常会提供数据分析软件,可以利用这些工具对测量结果进行进,步分析和处理。主要包括分析颗粒的大小分介、浓度等参数。
5.结果解读:根据分析结果,可以得出样品的题粒人小、浓度等信息。根据需要,可以进行进一步的实验或数据处理。
1.每次使用完毕后,及时清洁样品池,防止残留样品对下次测最结果的影响。
2.定期检查仪器的光源和探测器,确保其灵敏度和精度,
3.根据仪器使用手册,进行常规的维护和保养工作,如更换液体冷却系统中的冷却剂、定时校准仪器等。
4.定期进行仪器的校准和验证,以确保测量结果的准确性和可靠性。