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1.溶剂输送系统(高压泵)
将流动相以恒定流速和压力输送到色谱柱。
可实现梯度洗脱(多种溶剂按程序比例混合),提高分离效率。
进样系统(自动进样器或手动进样阀)
将微量样品(通常为几到几十微升)精确注入流动相中。
进样量重复性好,保证分析结果的准确性。
2.色谱柱(核心部件)
内部填充有固定相颗粒,是实现分离的关键。
常见类型:反相柱(C18)、正相柱、离子交换柱、尺寸排阻柱等,根据分析目标选择。
3.检测器
检测从色谱柱流出的组分,并将其浓度转化为电信号。
常用类型:
紫外-可见光检测器(UV-Vis):最常用,适用于有紫外吸收的物质。
二极管阵列检测器(DAD):可同时获取全波长光谱,用于峰纯度分析。
示差折光检测器(RID):通用型,但灵敏度较低。
荧光检测器(FLD):高灵敏度,适用于荧光物质。
质谱检测器(LC-MS):提供分子量信息,用于结构鉴定。
4.数据处理系统(工作站)
采集检测器信号,生成色谱图。
实现峰识别、积分、定性定量分析、方法保存等功能。
1.高分离效率:能分离结构相似、性质接近的化合物。
2.高灵敏度:可检测微量甚至痕量成分(纳克级)。
3.分析速度快:通常一次分析在几分钟到几十分钟内完成。
4.自动化程度高:可实现自动进样、梯度洗脱、数据处理。
5.应用范围广:适用于离子型、极性、非极性、大分子等多种化合物。
1.准备流动相:选择合适的溶剂并脱气(防止气泡影响泵和检测器)。
2.平衡系统:启动高压泵,使流动相流经色谱柱,直至基线稳定。
3.设置方法:设定流速、梯度程序、检测波长、柱温等参数。
4.进样分析:将样品注入系统,组分在色谱柱中分离。
5.检测与记录:各组分依次通过检测器,工作站记录信号并生成色谱图。
6.数据分析:根据保留时间定性,根据峰面积或峰高定量。
1.制药行业:药品成分分析、杂质检测、含量测定、溶出度测试。
2.食品检测:添加剂(如防腐剂、甜味剂)、农药残留、营养成分、真菌毒素分析。
3.环境监测:水中有机污染物(如多环芳烃、酚类)、农药残留检测。
4.生命科学:蛋白质、多肽、核酸、代谢物的分离与鉴定。
5.化工分析:聚合物、染料、中间体的组成分析。