体积排除色谱阅读：2279

　　在SEC方法中，柱填料的性质必须与溶质和淋洗体系相匹配。欲分离的高分子样品可能是油溶性的，也可能是水溶性的，前者只能在有机相体系中分离，后者只能在水相体系中分离，填料必须能被淋洗剂所浸润。SEC方法要求填料与试样尽可能不发生任何基团之间的相互作用，即在色谱过程中应尽可能避免非空间排除效应(如吸附、离子交换、分配等相互作用)的影响，而是完全按照分子尺寸大小进行分离。填料的多孔结构是SEC方法赖以建立的基础。有关填料的孔结构参数(如孔度、孔径、孔径分布以及孔结构形态等)对于SEC技术来说尤为重要。
　　一种高效的SEC填料，它的化学结构应当能够很好地适应欲分离对象和淋洗体系，并能有效地避免非空间排除现象的发生；它的物理结构除了具备均匀而合适的颗粒度外，还需要有光洁的表面(包括孔壁表面)、规整而通畅的孔结构形态、较大的孑L度以及适当的孔径大小与分布。
　　SEC填料的色谱表征，除了前面所述的柱效、选择性、分离度、穿透性等参数以外，还需满足如下三项色谱指标要求。
　　排除极限
　　表示填料可以用来分离高分子物质的限度、超过这个限度溶质就会在填料的粒隙间穿过而没有分离效果。排除极限主要取决于填料的有效孔径。
　　分离范围
　　表示填料可以分离高分子物质的分子量范围。它一般指分离柱的分子量一淋洗体积校正曲线的线性部分。分子量高于和低于这个范围的溶质分别被排除和渗透，均没有分离效果。分离范围主要取决于填料有效孔的分布范围。对于高分子类型SEC填料，分离范围通常以相差2个数量级的分子量为宜。
　　固流相比
　　指填料的有效孑L内体积与填料的颗料间隙体积之比值。它反映了色谱柱的分离容量，其值越大越好。在紧密填充的条件下，固流相比主要与填料的孔度有关。
　　以上所述，既是填料在制备过程中的主要研究内容，也是填料在应用过程中的重要参考依据。

　　体积排除色谱的分离，是在装填有多孔性材料的色谱柱中进行的。多孔材料的孔有大有小。孔径，有其“孔径分布”。当流动相携带分子量不同的溶质进入色谱柱后，溶质会因浓度差而渗入或扩散进入填料的孔中。也就是说，溶质在两相中的运动的动力是浓度梯度。但是，分子体积的大小，造成了在孔中扩散路径的差异。形象地说，填料颗粒上的孔有大有小，但对于溶剂分子来说，它们是足够大的，可以允许它们自由地扩散、进出。不过，对于体积大的分子来说，它们只能进入尺寸大于该分子的孔，对于比颗粒上的孔还要大的分子，它只能从孔旁流过。换句话说，分子量或分子尺寸较小的溶质，能占有更多的孔体积。这样，分子体积不同的混合物一齐进入柱端时，经过淋洗、扩散，总是体积大的分子先流出柱子，分子量小的(即体积小)分子滞后流出。

　　优点：
　　与其他几种色谱分离模式相比，体积排阻色谱具有几个突出的优点：
　　(1)出峰迅速，任何组分的保留体积均在K和%之间；
　　(2)溶质与固定相(填料)和流动相无相互作用，毋需梯度淋洗；
　　(3)分离时不会滞留杂质或残留物在柱上，故柱寿命长；
　　(4)对于大分子，可以测定分子量及分子量分布；
　　(5)对于生物大分子，有很高的活性回收率；
　　(6)柱负载较大，利于制备分离。
　　缺点：
　　作为一种分离方法，它也有本身难以克服的缺点。即，与其他色谱模式相比，体积排除色谱的分辨率及峰容量均相对较低。