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1.凝胶制备
首先需要将凝胶铸模系统织装好,并根据需要添加不同的单体和交联剂。将混合物加入到制备好的铸模系统中,静置几分钟,让凝胶凝固。
2.电泳分离
将凝固好的凝胶与电泳仪联接,加入缓冲液后进行电泳分离。时问和电压需要恨据实验需要进行调整。
3.凝胶切割
将分离好的凝胶进行切割(常用的是分子泡沫切割器)。根据实验需要,将所需的分子从切割好的凝胶中取出。
凝胶过滤原理是指将混合物通过具有特定孔径大小的凝胶进行筛选的过程。不同孔径的凝胶筛选出不同人小的分子。
在实验中,通常使用聚丙烯酰胶凝胶(PolyacrylamideGel,简称PAG)作为分离介质。PAG 是一种由聚丙烯酰胺单体聚合而成的交联聚合物。在交联聚合物中,单体分子相互交联形成一个网状结构。这种结构的孔径大小与交联程度、单体浓度等因素有关。
凝胶过滤分离的原理也非常简单。通过将混合物溶解在缓冲液中,然后将混合物加在凝胶上进行一定时间的电泳,即可将不同人小的生物人分子分离。
1.分离效果好
凝胶材料的孔隙结构可以根据生物分子的大小选择合适的凝胶材料,从而实现生物分子的有效分离。
2.操作简便
操作相对简单,只需将样品加载到凝胶板上,然后进行电泳分离即可。
3.高效快速
可以在短时间内完成生物分子的分离和纯化,提高实验效率。
凝胶净化系统一般由凝胶铸模系统、电泳仪及电转移系统和凝胶切割系统三部分组成。
凝胶铸模系统主要用丁铸造凝胶。电泳仪及电转移系统用丁进行电泳分离。凝胶切割系统常用的是分子筛泡沫切割器,用于分离所需的生物大分子。